Растенок - все о здоровье детей и будующих мам.
ГлавнаяНовостиКонтакты
 

Инвазивные методы диагностики инфекции Helicobacter pylori

Инвазивные методы диагностики инфекции Helicobacter pylori
Инвазивные методы базируются на исследовании биоптатов, полученных во время эндоскопического исследования. Несмотря на очевидный прогресс в развитии неинвазивных методов и тенденцию к их предпочтению в последние годы, эндоскопия по-прежнему остается базовым методом диагностики патологии верхних отделов желудочно-кишечного тракта, ее проведение регламентировано отечественными Стандартами диагностики и лечения болезней органов пищеварения МЗ РФ. Наша страна относится к регионам с высокой частотой рака желудка, что, согласно Международным рекомендациям, также оправдывает широкое диагностическое использование эндоскопии. В 2000 г. приняты рекомендации ESPGHAN и NASPGN по ведению инфекции Helicobacter pylori у детей. Оба документа сходны в диагностических подходах, в частности в обоих постулируется, что эндоскопия с биопсией - наиболее предпочтительный метод диагностики Helicobacter pylori у детей. Дети должны обследоваться на Helicobacter pylori при наличии симптомов органических заболеваний.


Предпочтение при первичной диагностике отдается инвазивным методам еще и потому, что выяснение причины симптомов, а не только диагностика Helicobacter pylori - главная цель исследования. Helicobacter pylori чаще выявляется в антральном отделе желудка. Helicobacter pylori в антральном отделе желудка у детей с Helicobacter pylori-ассоциированными гастродуоденальными заболеваниями обнаруживался почти в 2 раза чаще, чем в фундальном и луковице двенадцатиперстной кишки, при этом во всех отделах доминировала I степень обсемененности. Таким образом, для уменьшения вероятности ошибок необходимо исследовать не менее 2 биоптатов из антрального отдела желудка. Следует учитывать, получал ли пациент ранее антисекреторные препараты, в частности ингибиторы протонной помпы, поскольку прием последних может способствовать перемещению HP в тело желудка и обнаружение Helicobacter pylori становится более вероятным в биоптатах, взятых их фундального, а не антрального отдела.

Бактериологический метод включает несколько этапов, необходимых для идентификации микроорганизма: транспортировку, культивирование, изучение культуры.


Предметом исследования для микробиологической диагностики Helicobacter pylori служит биоптат слизистой оболочки желудка или двенадцатиперстной кишки. Поскольку биопсия проводится в эндоскопическом отделении, а исследование должнопроводиться в бактериологической лаборатории, а также в связи с тем, что микроорганизм гибнет в воздушной среде, так как микроаэрофил, биоптат сразу после взятия должен быть помещен в транспортную среду. Одна из наиболее удобных и доступных транспортных сред - 20% раствор глюкозы, при температуре +4 °С биоптат можно хранять в течение 5 ч без потери жизнеспособности бактерий. Некоторые исследователи использовали в качестве транспортных сред питательные бульоны, тиогликолевую среду, среду Кэри-Блэр, среду Стюарта. В таких средах жизнеспособность Helicobacter pylori сохраняется в течение суток.Пробы подлежат обработке и посеву немедленно после доставки в лабораторию. Наилучшие результаты получают при посеве в первые 2-4 ч. В качестве основы питательных сред для культивирования Helicobacter pylori используют агар Колумбия, среду Скирроу с антибактериальными препаратами, подавляющими рост других микроорганизмов: ванкомицином, полимиксином и триметопримом.


В настоящее время разработана специальная селективная среда Pylori. При использовании сред, содержащих кровь и ее компоненты, недопустимо применение человеческой крови, поскольку она может содержать антитела к Helicobacter pylori, что существенно изменит результаты исследования.

Инкубация посевов осуществляется в микроаэрофильных условиях при содержании кислорода не более 5%. Такие условия могут быть созданы заполнением герметически закрывающихся сосудов газовой смесью: 5% кислорода, 10% углекислого газа, 85% азота, выпускаемой в стальных баллонах под давлением 100-120 атм. Газовой смесью заполняют микроанаэростаты или вакуумные термостаты, из которых вакуумным насосом предварительно откачан атмосферный воздух. Сходные условия можно создать в микроанаэростате при использовании газорегенераторных пакетов, продуцирующих газовую смесь при добавлении в них воды.

Оптимальная температура инкубации 37 °С, хотя имеются сведения, что отдельные штаммы могут расти и при более высокой температуре. Helicobacter pylori не растут при температуре ниже 27 °С и выше 42 °C. Время инкубации в термостате большинство исследователей определяют сроком 3-7 сут, такой разброс обусловлен использованием для культивирования Helicobacter pylori различных сред, а также, очевидно, разными методологическими подходами и свойствами штаммов.

На кровяной питательной среде Helicobacter pylori образует мелкие, круглые, гладкие, прозрачные, росинчатые колонии диаметром 1-3 мм. Такие колонии для дальнейшего изучения пересевают на сектора чашки кровяного агара и инкубируют в тех же условиях в течение 3-5 сут. Характерный однотипный рост культуры на секторах кровяных чашек подлежит в дальнейшем идентификации для окончательного решения вопроса о принадлежности выделенной культуры к виду Helicobacter pylori. Для этого изучают культуру в мазке, окрашенном по Граму. Типичные клетки Helicobacter pylori выглядят при микроскопии с иммерсией как тонкие изогнутые нежно-розовые палочки. На 5-7-е сутки культивирования и при многократных пассажах могут появиться признаки старения культуры - менее изогнутые палочки, кокковидные формы. Хранение выделенных культур Helicobacter pylori проводится в условиях глубокого замораживания в холодильных камерах при -70 °С или в жидкой среде при -196 °С. Агаровые культуры эмульгируют в средах с криопротекторами (глицерин с добавлением бычьей сыворотки, крови или бульона), разливают в ампулы или в пробирки для микропроб и замораживают. Жизнеспособность культур сохраняется при таких условиях в течение нескольких месяцев.

Таким образом, микробиологический метод диагностики Helicobacter pylori-инфекции включает несколько этапов, необходимых для идентификации микроорганизма. Этот метод обладает наибольшей 100%-й специфичностью из всех существующих ныне методов диагностики Helicobacter pylori-инфекции, не дает ложноположительных результатов, что позволило некоторым исследователям назвать его «золотой стандарт». Однако он имеет ряд существенных недостатков. Во-первых, для успешного культивирования Helicobacter pylori необходимо произвести посев в кратчайшие сроки после проведения биопсии, что не всегда возможно. Во-вторых, сложные условия культивирования не позволяют широко использовать этот метод в реальных условиях. В-третьих, сроки проведения исследования не дают возможности ответить на вопрос о наличии Helicobacter pylori ранее чем через неделю, что неминуемо влечет за собой промедление с назначением соответствующей терапии. В-четвертых, метод очень дорогой и трудоемкий, если его используют с единственной целью обнаружения Helicobacter pylori, он не оправдывает затрат, в этом случае целесообразнее использовать более дешевые, быстрые и информативные методы. Учитывая перечисленные недостатки, становится понятным, почему чувствительность бактериологического метода значительно уступает его специфичности и составляет, по данным разных авторов, от 50 до 90%. По нашим сведениям, чувствительность бактериологического метода невысока и составляет 51%, что объясняется необходимостью транспортировки материала в лабораторию. Однако этот метод позволяет не только идентифицировать микроорганизм, но и изучить его свойства, в частности оценить чувствительность к различным антибактериальным препаратам. В условиях возрастающей резистентности Helicobacter pylori к антибиотикам бактериологический метод представляет особую ценность для больных, уже получивших один или два неудачных курса эрадикационной терапии, так как изучение индивидуальной чувствительности к антибиотикам позволяет сформировать оптимальную схему лечения.Повышение чувствительности бактериологического метода возможно за счет использования ростовых добавок при культивировании, таких, как сульфат железа, пируват натрия, свиной муцин, улучшающих рост Helicobacter pylori.

В последнее время стало возможным бактериологическое исследование не только биопсионного материала, но и желудочного сока, извлекающегося с помощью капсулы на нити - Стринг-тест. Однако, по мнению ряда авторов, посевы любого другого материала, кроме биопсионного, обладают еще более низкой чувствительностью.


Оцените статью: (9 голосов)
4.33 5 9
Статьи из раздела Инфекции на эту тему:
Молекулярно-генетические методы диагностики инфекции Helicobacter pylori
Неинвазивные методы диагностики инфекции Helicobacter pylori





Новые статьи

» Ожирение
Ожирение
Основные принципы лечения ожирения: • низкокалорийная диета; • изменение образа жизни; • дозированные физические нагрузки; • физиотерапия и иглорефлексотерапия; • лекарственная терапия (препараты... перейти

» Плоскостопие
Плоскостопие
Плоские стопы делят на врожденные (около 5%) и приобретенные (до 95%). Врожденное плоскостопие встречается очень редко и связано с костными искривлениями вследствие неправильного положения плода, в ре... перейти

» Сколиоз
Сколиоз
Лечебная физическая культура - важнейшее средство в комплексной терапии сколиоза, которая направлена на решение следующих задач: • создание физиологических предпосылок для восстановления правильного ... перейти

» Нарушение осанки
Нарушение осанки
Путь к формированию правильной осанки и направленной коррекции ее нарушений начинается с методически правильно выполненного осмотра и, при необходимости, проведения углубленного обследования. Это обус... перейти

» Детский церебральный паралич
Детский церебральный паралич
Основным средством лечебной физкультуры при детском церебральном параличе являются специально подобранные упражнения в соответствии с задачами лечебно-восстановительной работы, определяемые состоянием... перейти

» Хроническая почечная недостаточность
Хроническая почечная недостаточность у детей - это неспецифический синдром, развивающийся вследствие необратимого снижения почечных гомеостатических функций при любом тяжелом прогресс... перейти

» Тубулоинтерстициальный нефрит и интерстициальный нефрит
Тубулоинтерстициальный нефрит и интерстициальный нефрит
Тубулоинтерстициальный нефрит или интерстициальный нефрит - острое или хроническое неспецифическое абактериальное, недеструктивное воспаление интерстициальной ткани почек, сопровождающееся вовлечением... перейти